Transient gene expression in banana protoplasts and cells

• Chapter Authors : Sági, L.; Remy, S.; Panis, B.; De Smet, K.; Cammue, B.P.A.; Volckaert, G.; Swennen, R.


• Document type : Conference paper


• Year of publication : 1993


• Conference : International Symposium on Genetic Improvement of Bananas for Resistance to Diseases and Pests, Montpellier, France, 1992/09/7-9


• Book title : Breeding banana and plantain for resistance to diseases and pests


• Editors : Ganry, J.


• Publisher(s) : CIRAD-FLHOR


• Place of publication : Montpellier, France


• Pages : 379-380


• Language(s) : English


• Abstract : The recent development of embryogenic cell suspensions forms significant progress in tissue culture of banana. It makes it possible to obtain material for cryopreservation and to perform genetic manipulations on banana. The transitory expression of genes in banana cells was studied. Protoplasts were isolated and purified from cell suspensions of 'Bluggoe' (ABB). Transformation was performed by electroporation using the plasmid pBI221 containing a chimeric gene uidA. Strong betaglucuronidase (GUS) expression was easily observed after 24 h of culture and blue protoplasts were easily detected by an in situ test. The average frequency of expression of the GUS gene varied from 10 to the minus 4 and 5 10 to the minus 5. The technique is being optimised. Successful application of the technique of particle bombardment applied to intact cells in suspension to induce expression of the GUS gene at higher frequencies. The results encourage the regeneration of stable transformants in banana.
  
  [Expression transitoire de gènes dans les cellules et protoplastes de bananier]
  
  [La récente mise au point de la culture de suspensions cellulaires embryogènes représente une avancée significative pour la culture in vitro du bananier. Elle permet d'obtenir du matériel pour la cryoconservation et d'effectuer des manipulations génétiques sur le bananier. L'expression transitoire de gènes dans les cellules de bananier a été étudiée. Des protoplastes ont été isolés et purifiés à partir de suspensions de cellules embryogènes du cv. 'Bluggoe' (ABB). La transformation a été effectuée par électroporation avec le plasmide pBI221 contenant un gène chimérique uidA. Une forte expression de la bêtaglucuronidase (GUS) a été aisément observée après 24 h de culture et des protoplastes bleus ont pu être facilement détectés par un essai in situ. La fréquence moyenne d'expression transitoire du gène GUS varie entre 10*-4 et 5.10*-5. Technique en voie d'optimisation. Application avec succès de la technique de bombardement de particules à des cellules intactes en suspension, pour induire l'expression du gène GUS à des fréquences plus élevées. Ces résultats encouragent à régénérer des transformants stables chez le bananier.]
  
  [Manifestación transitoria de genes en protoplastos y células de bananos]
  
  [El reciente desarrollo de las suspensiones de células embriogénicas representa un progreso significativo en el cultivo de tejidos de bananos. Se estudió la manifestación transitoria de los genes en las células de banano. Los protoplastos fueron aislados y purificados a partir de las suspensiones celulares del 'Bluggoe' (ABB). La transformación se realizó mediante electroporación utilizando el plásmido pBI221, que contenía un gene quimera uidA. Una fuerte manifestación de la betaglucoronidasa (GUS) fue observada con facilidad después de 24 h de cultivo y los protoplastos azules fueron detectados fácilmente mediante una prueba in situ. La frecuencia promedio de la manifestación del gene GUS varió de 10 exp.-4 y 5.10 exp.-5. La técnica está siendo optimizada. Aplicación exitosa de la técnica de bombardeo con partículas a las células intactas en la suspensión para inducir la manifestación del gene GUS a frecuencias más altas. Los resultados fomentan la regeneración de transformantes estables en banano.]


• Keywords : CULTURE TECHNIQUES; FREEZING; PROTOPLASTS; CELL CULTURE; BIOLOGICAL PRESERVATION; GENE EXPRESSION; ELECTROPORATION; PLASMIDS; BELGIUM


• Open access : Yes


• PDF :


• Musalit document ID : FA950084

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