Transient gene expression in transformed banana (Musa cv. Bluggoe) protoplasts and embryogenic cell suspensions

• Authors : Sági, L.; Remy, S.; Verelst, B.; Panis, B.; Cammue, B.P.A.; Volckaert, G.; Swennen, R.


• Document type : Journal article


• Year of publication : 1995


• Journal title : Euphytica


• Number : 85




• Pages : 89-95


• Peer-reviewed : Yes


• ISSN : 1573-5060


• Language(s) : English


• Abstract : In order to introduce currently-available genes with agronomical value into banana, two genetic transformation protocols have been optimized. Firstly, regenerable protoplasts isolated from embryogenic cell suspensions of the cultivar 'Bluggoe' have been used for the introduction of several chimaeric uidA gene constructs by electroporation. With the inclusion of polyethylene glycol and heat shock, the frequency of transiently expressing protoplasts reached 1.8 percent. A duplicated 35S promoter with an alfalfa mosaic virus leader sequence induced the highest expression rate among the constructs tested. Embryogenic cell suspensions of cultivar 'Bluggoe' have also been bombarded with accelerated particles coated with a high expression uidA gene construct using a biolistic gun. After a partial optimization of the procedure, transient beta-glucuronidase assays reproducibly demonstrated the presence of 400 blue foci in 30 microlitres of settled cell volume (approximately 25 mg cells). Selection and characterization of antibiotic-resistant transformed cultures is in progress.
  
  [Expression génétique transitoire chez des protoplastes et des suspensions de cellules embryogènes de bananier (Musa cv. Bluggoe) transformés.]
  
  [Afin d'introduire dans le bananier des gènes à valeur agronomique actuellement disponibles, deux protocoles de transformation génétique ont été optimisés. Tout d'abord, des protoplastes régénérables isolés de suspensions cellulaires embryogènes du cultivar 'Bluggoe' ont été utilisés pour l'introduction de plusieurs gènes chimères uidA par électroporation. Avec l'inclusion de polyéthylène glycol et un choc thermique, la fréquence de protoplastes s'exprimant transitoirement atteint 1,8 pour cent. Un promoteur 35S dupliqué avec une séquence de tête de virus alfalfa de la mosaïque induit le taux d'expression le plus élevé parmi les chimères testées. Des suspensions de cellules embryogènes du cultivar 'Bluggoe' ont aussi été bombardées avec un canon biolistique par des particules accélérées recouvertes d'un gène chimère uidA à expression élevée. Après optimisation partielle de la procédure, les dosages de la bêta-glucuronidase révèlent de manière reproductible la présence de 400 foci bleu dans 30 microlitres de volume cellulaire formant un dépôt (environ 25 mg de cellules). La sélection et la caractérisation de cultures transformées résistant aux antibiotiques sont en cours.]
  
  [Expresión genética transitoria en los protoplastos y suspensiones de células embriogénicas de banano (Musa cv. Bluggoe) transformados.]
  
  [Para introducir genes de valor agronómico actualmente disponibles en los bananos, fueron optimizados dos protocolos de transformación genética. En primer lugar, se utilizaron los protoplastos regenerables, aislados de las suspensiones de células embriogénicas del cultivar 'Bluggoe', para introducir varios genes quimeras uidA mediante electroporación. Con la inclusión del polietileno glicol y choque eléctrico, la frecuencia de los protoplastos con expresión transitoria alcanzó un 1.8 por ciento. Un promotor 35S duplicado con una secuencia líder del virus del mosaico de alfalfa indujo la mayor tasa de expresión entre las quimeras examinadas. Las suspensiones de células embriogénicas del cultivar 'Bluggoe' también han sido bombardeadas a través de un cañon biolístico por partículas aceleradas, recubiertas con un gen quimera uidA de alta expresión. Después de una optimización parcial del procedimiento, las dosis de la beta-gluconasa revelaron de manera reproducible la presencia de 400 foci azules en 30 microlitros de volumen celular formado en un recipiente (aproximadamente, 25 mg de células). Actualmente, se realiza la selección y la caracterización de los cultivos transformados resistentes a los antibióticos.]


• Keywords : PROTOPLASTS; GENETIC ENGINEERING; CELL CULTURE; BLUGGOE ABB; GM BANANA; GENE EXPRESSION; ELECTROPORATION


• Open access : No


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